易错PCR法提高L-氨基酸脱氨酶全细胞转化L-异亮氨酸生产α-酮-β-甲基正戊酸效率

• 作者: 刘龙 堵国成 李江华 郭濛檬 陈坚
• 来源期刊: 食品与生物技术学报
• 学科: 生物学
• 关键词: L-氨基酸脱氨酶 易错PCR 全细胞转化 α-酮-β-甲基正戊酸
• 年，卷（期）: 2018,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1173-1180
• 页数: 8页
• 分类号: Q819
• 字数: 4561字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2018.11.009

摘要

对奇异变形杆菌Proteus mirabilis中的L-氨基酸脱氨酶进行定向进化,利用易错PCR技术向基因中引入随机突变,建立突变文库来筛选可获得较高α-酮-β-甲基正戊酸产量的突变株.突变株7/23-6最适全细胞转化反应条件是以pH 8.5 Tris-HC1为缓冲液,用900 mmol/L L-异亮氨酸在30℃下进行催化反应21～24 h,其α-酮-β-甲基正戊酸产量可以达到102 g/L,底物转化率达到87％.与对照菌相比,α-酮-β-甲基正戊酸产量和底物转化率均提高了13％,热稳定性提高了36.7％.