人YPEL4基因的原核表达及兔血清多克隆抗体的制备与鉴定

• 作者: 吴秀山 彭忠禄 罗桐秀
• 来源期刊: 中国优生与遗传杂志
• 学科: 医学
• 关键词: YPEL4 融合蛋白 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2009,（8）
• 所属期刊栏目: 分子、生化遗传学与PCR技术
• 页码范围: 18-20,26
• 页数: 4页
• 分类号: R394.3
• 语种: 中文

摘要

目的 通过PCR技术扩增,将YPEL4基因亚克隆到pGEX-4T-1原核表达载体,经酶切及测序鉴定后,转化E.coli BL21大肠杆菌,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导融合蛋白表达.融合蛋白在细菌裂解液的包涵体和上清中都有较高的表达,故取其上清液用谷胱甘肽琼脂糖珠(Glutathione sepharo-seTM 4B)亲和纯化目的蛋白.将纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,进行WesternBlot检测抗体及其效价.结果 获得了高效价的特异性兔抗YPEL4多克隆抗体,为YPEL4基因进一步的功能研究奠定了基础.