全合成3α-羟类固醇脱氢酶基因密码子优化及酶性质研究

• 作者: 仝艳军 杨海麟 王志臻 王武
• 来源期刊: 工业微生物
• 关键词: 3α-羟类固醇脱氢酶 基因全合成 密码子优化 重组DNA表达 酶学性质
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 34-39
• 页数: 6页
• 字数: 3776字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6678.2014.01.007

摘要

以NCBI报道的Comamonas testosteroni ATCC11996中3α-羟类固醇脱氢酶基因(3α-hydroxysteroid dehydrogenase gene,3α-hsd,AF092031.2)为模板,通过改变碱基序列但不影响酶的氨基酸序列,将该基因相对于大肠杆菌的密码子适用指数由0.78提高到0.87,GC含量由原来的63.17降低到56.46,大幅度减少了GC簇及寡聚A和T局域的存在,提高 3α-hsd的可表达性.全合成基因定向克隆到pET28a载体中,并转化至大肠杆菌B12l(DE3)中表达.采用乳糖诱导后,SDS-PAGE检测在约27 kD处有一高效表达的蛋白条带.采用Ni螯合柱分离纯化3α-HSD,获得了较高纯度及较高的产率.酶学性质初步分析表明,全基因合成表达的3α-HSD的性质与原始的3α-HSD基本相同.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王武	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	124	898	16.0	22.0
2	杨海麟	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	104	690	14.0	20.0
3	仝艳军	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	9	14	3.0	3.0
4	王志臻	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	1	0	0.0	0.0