深海放线菌生淀粉酶基因的克隆表达及酶学特性研究

• 作者: 张偲 李丽珍 杨键 田新朋 苏宏飞 麦志茂 龙丽娟
• 来源期刊: 生物加工过程
• 学科: 工学
• 关键词: 深海放线菌 基因组挖掘 有机物降解 淀粉结合域 克隆表达
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 研究与开发
• 页码范围: 35-40
• 页数: 6页
• 分类号: Q93|TQ925.1
• 字数: 4314字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3678.2015.02.007

摘要

从深海放线菌Streptomyces sp?SCSIO 03032基因组中扩增到1条含淀粉结合域的水解糖苷13家族基因amy032，该基因编码氨基酸与已知蛋白一致性最高为67％。将amy032插入表达载体pET32a启动子下游，构建重组载体pET amy。重组质粒导入大肠杆菌Rosseta （ DE3）菌株中，SDS PAGE分析结果显示目的基因成功实现异源表达。 Ni NTA对重组酶进行纯化，并对其酶学性质进行表征。结果表明：重组淀粉酶AMY032的最适作用温度为50℃，最适 pH 为8?0，以可溶性淀粉为底物时的比酶活为（276±57）U／mg，Km为0?02 g／L， Vmax为70 mg／（ L·min）。 Ca2＋能提高该酶的催化活性，Ni2＋、Cu2＋、Zn2＋和Mn2＋对该酶有抑制作用。 AMY032对生玉米淀粉和生大米淀粉具有水解活性，其比酶活分别为（49±12） U／mg和（39±11） U／mg；扫描电镜结果显示AMY032使生玉米淀粉的表面产生明显凹陷。