丝胶抗冻肽在大肠杆菌中的重组表达及其抗冻活性初探

• 作者: 吴金鸿 张莉 李灵 汪少芸 王正武 金泉
• 来源期刊: 食品工业科技
• 学科: 工学
• 关键词: 丝胶肽 大肠杆菌 重组表达 抗冻活性
• 年，卷（期）: 2018,（21）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 141-145,206
• 页数: 6页
• 分类号: TS210.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2018.21.026

摘要

为了高效制备抗冻肽,研究一种丝胶抗冻肽目的基因SerD在大肠杆菌BL21菌株中的重组表达,并分析表达产物的抗冻活性.首先合成SerD基因片段,经KpnI和XhoI双酶切后定向插入质粒载体Pet32a中,构建表达质粒Pet32a-SerD,然后电转化入大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下进行目的基因表达,利用镍琼脂糖亲和层析对目的重组蛋白进行纯化,并对其进行抗冻活性分析.结果表明,最佳表达条件为重组菌在20℃诱导16 h;通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium Dodecyl Sulphate-PolyAcrylamide Gel Eleetrophoresis,SDS-PAGE)和蛋白质免疫印迹试验(Western-Blot)鉴定重组蛋白表达成功且His-SerD融合蛋白表达的分子量在25～ 35 kDa之间;胞内表达His-SerD融合蛋白的大肠杆菌BL21-SerD复苏后的生长活性明显高于PBL空载菌;添加His-SerD融合蛋白可明显降低溶液中冰晶颗粒大小,具有较好的重结晶抑制效果.本文通过基因工程方法在大肠杆菌中成功构建丝胶肽抗冻肽的重组表达系统,并最终获得具有抗冷冻胁迫保护作用的His-SerD融合蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张莉	上海交通大学农业与生物学院	103	710	13.0	22.0
2	汪少芸	福州大学生物科学与工程学院	117	645	14.0	18.0
3	王正武	上海交通大学农业与生物学院	84	639	14.0	20.0
4	吴金鸿	上海交通大学农业与生物学院	39	300	11.0	16.0
5	李灵	福州大学生物科学与工程学院	3	8	2.0	2.0
6	金泉	上海交通大学农业与生物学院	2	1	1.0	1.0