外切型琼胶酶AgaO的高效表达及酶学性质表征

• 作者: 李俊鸽 李淑焕 王延辉 程媛媛 陈庆敏 韩文君
• 来源期刊: 食品工业科技
• 学科: 工学
• 关键词: 琼胶酶 密码子优化 原核表达 酶学性质 新琼二糖
• 年，卷（期）: 2019,（7）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 107-113
• 页数: 7页
• 分类号: TS201.3
• 字数: 5935字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2019.07.019

摘要

根据大肠杆菌的密码子偏好性,优化外切型琼胶酶AgaO的基因并人工全合成,克隆入表达载体质粒pET-30a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),优化表达条件即诱导温度、诱导时间和诱导剂IPTG终浓度,纯化重组蛋白rEAgaO,并分析其酶学性质变化.结果 表明,重组酶rEAgaO在16℃、IPTG终浓度0.1 mmol/L条件下诱导20 h时表达量最高;95％以上的重组蛋白质为水溶性表达,产量约为1432.7 mg/L,较优化前原始基因的产量提高了10.9倍;重组酶rEAgaO的最适反应温度为45℃,在低于40℃的温度下预处理2h后,仍然具有90％以上的残余活性,最适pH为7.0,在pH6.0～10.0不同缓冲体系4℃处理2h仍保留69.5％以上的活性;该酶降解琼脂糖后的最终产物经TLC分析鉴定为新琼二糖.基因密码子优化虽不改变蛋白质氨基酸序列,但可明显提高水溶性重组蛋白质的产率及酶活,对促进相关酶类的生产和应用具有借鉴意义.