大肠杆菌苹果酸脱氢酶基因mdh的克隆、高效表达及酶学性质

• 作者: 夏海锋 徐美娟 李倩 饶志明
• 来源期刊: 食品与生物技术学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 大肠杆菌 克隆表达 苹果酸脱氢酶 纯化 酶学性质
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 生物技术与发酵工程
• 页码范围: 267-272
• 分类号: Q814
• 字数: 5089字
• 语种: 中文

摘要

以大肠杆菌基因组DNA为模板,扩增得到苹果酸脱氢酶(mdh)编码基因mdh,构建了重组菌pET-28a-mdh/BL21并成功表达了mdh,大小约36 000.选用Ni柱亲和层析法纯化具有活性的苹果酸脱氢酶(mdh),纯化后比酶活达到112.5 U/mg,纯化倍数达2.62倍,回收率为59%.并对该酶的酶学性质进行了初步研究,其中反应最适PH值为6.0,在PH值2.0～6.0范围内稳定;反应最适温度为37℃,在42℃以下酶的稳定性较好.K+对酶有明显的激活作用,Cu2+对酶有抑制作用,Hg2+和Zn2+对酶有很强的抑制作用.醇类对酶的活力影响不大,丙三醇可显著提高酶的热稳定性.酶动力学参数以草酰乙酸为底物的Km为0.235 mmol/L,Vmax为0.47 μmol/(L·min).

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	饶志明	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	107	599	12.0	20.0
5	李倩	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	15	73	4.0	8.0
9	徐美娟	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	51	125	6.0	9.0
13	夏海锋	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	26	96	5.0	8.0