粘质沙雷氏菌H3010发酵型D-乳酸脱氢酶基因的克隆表达、纯化及酶学性质研究

• 作者: 储炬 周文瑜 张燎原 朱家文 沈亚领 邱昱 魏东芝
• 来源期刊: 工业微生物
• 学科: 工学
• 关键词: D-乳酸脱氢酶 粘质沙雷氏菌 表达 纯化 酶学性质
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 30-37
• 分类号: TQ92
• 字数: 5900字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6678.2012.04.006

摘要

通过PCR技术从粘质沙雷氏菌H3010基因组DNA中扩增出该D-乳酸脱氢酶基因,连接至pET-28a(+)表达载体,转入大肠杆菌BL21 (DE3)中进行了重组表达,优化了酶纯化的条件,并对其酶学性质进行初步研究.结果表明,获得的该酶编码基因全长993 bp,编码330个氨基酸,大小为37 kDa.经优化表达及纯化条件后重组酶纯度可达90％.酶学性质研究发现,该重组酶最适反应温度为60℃,最适酶促反应pH为7.5(0.2 mol/L磷酸盐缓冲液),37℃下测得对底物丙酮酸的动力学参数Km =3.39 mmol/L,Vmax =6.87 mmol/( mg · min),对辅酶NADH的动力学参数Km=1.43 mmol/L,Vmax=1.61 mmol/( mg· min).为酶法生产D-乳酸及利用代谢工程构建产D-乳酸的基因工程菌打下基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	魏东芝	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	158	1415	22.0	29.0
2	储炬	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	227	1871	22.0	29.0
3	朱家文	华东理工大学化工分离研究所	106	682	15.0	21.0
4	邱昱	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	1	0	0.0	0.0
5	张燎原	福建农林大学生命科学学院	14	47	5.0	6.0
6	周文瑜	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	10	112	6.0	10.0
7	沈亚领	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	29	312	10.0	17.0