乙醛脱氢酶的克隆表达及其酶学性质

• 作者: 吴殿辉 孙军勇 张明 李晓敏 林材 蔡国林 豆欣喜 陆健
• 来源期刊: 食品与发酵工业
• 关键词: 人源乙醛脱氢酶2 酿酒酵母 克隆表达 酶学性质
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 22-28
• 页数: 7页
• 字数: 4736字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.016237

摘要

将GeneBank中人源乙醛脱氢酶2的基因序列根据酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的密码子偏好性进行密码子优化后合成目的基因ALDH2,采用融合PCR技术,构建人源ALDH2基因的表达组件TRP1L-URA3-TPIp-ALDH2-TPIt-TRP1R.通过电转化的方法将基因表达组件通过同源重组整合到酿酒酵母W303-1A的基因组上,获得基因工程菌W303-ALDH2.工程菌发酵后的粗酶液经His TrapTM excel亲和层析柱纯化获得重组AL-DH2,其活性为20.70 U/mg;重组酶的相对分子质量是56 kDa;最适反应pH和温度分别为5.0和35℃;除Na+外,K+、Ca2+、Mg2+、Mn2+均能不同程度地提高ALDH2的酶活.以乙醛为底物测得酶的Km值为0.908 mmol/L,最大反应速度Vmax为114.94 U/mg;以辅酶NAD+为底物测得酶的Km值为0.282 mmol/L,最大反应速度Vax为58.82 U/mg.