共表达谷氨酰-tRNA还原酶增强染料脱色过氧化物酶在大肠杆菌中的表达活性

• 作者: 丁亮亮 唐蕾 潘梅 顾鹏帅
• 来源期刊: 食品与发酵工业
• 关键词: 大肠杆菌 褐色嗜热裂孢菌 血红素 染料脱色过氧化物酶 共表达
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 45-50
• 页数: 6页
• 字数: 3591字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.022459

摘要

染料脱色过氧化物酶(dye-decoloorizing peroxidase,DyP)属于以血红素为辅基的新型过氧化物酶类,常因缺乏辅因子而导致催化活性低.将来源于褐色嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)的染料脱色过氧化物酶基因(TfuDyP)与大肠杆菌谷氨酰-tRNA还原酶基因(hemA),构建重组质粒phemA-DyP,转化至E.coli BL21中进行共表达.分别以2,2-联氮-二(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)和顽固性染料活性蓝19(RB19)、溴酚蓝、溴甲酚绿为底物检测TfuDyP的催化活力以及染料脱色效率.结果表明,诱导后的共表达菌株pAD胞内血红素含量为9.8μmol/L,而单独过表达基因TfuDyP的菌株pD仅为3.4μmol/L.TfuDyP纯酶的全波长扫描分析表明,在菌株pAD中DyP酶与血红素的结合度相比pD有较大幅度的提升.pAD菌株表达的DyP酶活力较pD菌株提高了110％,酶活力的提高使其在染料脱色应用方面也得到增强.在pAD菌株培养基中分别添加谷氨酸(Glu)、FeCl2使得胞内血红素含量、DyP酶活力和染料脱色效率比未添加时进一步提高.以上结果为TfuDyP的功能开发奠定了基础,同时也为其他血红素依赖性过氧化物酶的研发提供借鉴.