产乙醇酸氧化酶的重组毕赤酵母的构建及催化合成乙醛酸的研究

• 作者: 何宁 卢英华 孙道华 李清彪 杨坤 潘美平 王远鹏 邵文尧
• 来源期刊: 工业微生物
• 学科: 生物学
• 关键词: 乙醇酸氧化酶 重组毕赤酵母 乙醛酸
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 45-50
• 页数: 6页
• 分类号: Q93
• 字数: 4267字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6678.2009.03.010

摘要

乙醇酸氧化酶(GO)是植物光呼吸途径中的一种关键酶,可以催化乙醇酸生产乙醛酸.从新鲜菠菜叶中提取总RNA,利用RT-PCR技术获得编码GO基因的cDNA片断.通过基因重组将GO基因克隆到载体pAO815中,构建了胞内表达载体pAO815/GO,重组质粒经电转整合至甲醇营养酵母GS115染色体. 在混合碳源为10 g/L山梨醇和0.5 g/L甲醇的培养条件下,细胞的GO酶活达到 474 IU/g (DCW). 利用该重组毕赤酵母作为催化剂生产乙醛酸,结果表明:在乙醇酸浓度为0.25 mol/L,重组酵母湿菌体为1O g/L,黄素单核苷酸(FMN)浓度为0.01 mmol/L, pH 8.0,20 ℃,反应18 h后乙醛酸的产率达到51.8%.