Bacillus clarkii 7364 γ-环糊精葡萄糖基转移酶的可溶性表达及其催化特性分析

• 作者: 万一 李皎 杨国武 王军 王琰 邓媛
• 来源期刊: 生物加工过程
• 学科: 生物学
• 关键词: γ-CGTase Bacillus clarkii 可溶性表达 纯化 产物专一性
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 生物制造
• 页码范围: 7-12
• 页数: 6页
• 分类号: Q812|Q815
• 字数: 4703字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3678.2017.02.002

摘要

按照大肠杆菌偏爱密码子对Bacillus clarkii 7364来源的γ-环糊精葡萄糖基转移酶(γ-CGTase)进行优化,构建γ-CGTase原核表达菌株,摸索γ-CGTase的可溶性表达条件及纯化条件,并对其催化特性进行研究.结果表明:在28 ℃条件下实现了γ-CGTase的高效可溶性表达,可溶性蛋白占总蛋白表达量的63%,酶活可达3 830 U/mL.经(NH4)2SO4沉淀和α-CD-Sepharose 6B亲和柱纯化后,酶蛋白纯化了12.97倍,酶收率20.31%.使用该酶对木薯淀粉进行转化,转化产物中γ-环糊精(γ-CD)的比例可达90.9%,几乎无α-环糊精(α-CD),与天然酶的79%相比提高了15%.将该基因工程菌在20 L发酵罐中发酵,10 h后酶活达到4 375 U/mL,证实了其工业化放大的可能.该酶具有非常高的转化专一性,有非常好的工业化前景.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王琰		17	61	4.0	6.0
2	万一		37	127	7.0	10.0
3	邓媛		31	81	5.0	7.0
4	杨国武		22	176	5.0	13.0
5	李皎		24	94	5.0	8.0
6	王军		15	29	3.0	4.0