MTSase和MTHase在Brevibacillus brevis中的克隆表达及应用研究

• 作者: 吴世雄 吴丹 吴敬 姚锴琳 宿玲恰
• 来源期刊: 食品与生物技术学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 麦芽寡糖基海藻糖合成酶 麦芽寡糖基海藻糖水解酶 短短芽孢杆菌 酶活力 海藻糖
• 年，卷（期）: 2018,（8）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 838-844
• 页数: 7页
• 分类号: Q814.9
• 字数: 4350字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2018.08.009

摘要

为实现将来源于嗜酸热硫化叶菌(Su lfolobus acidocaldarius)ATCC 33909的麦芽寡糖基海藻糖合成酶(MTSase)和麦芽寡糖基海藻糖水解酶(MTHase)在短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)中的重组表达,分别以重组质粒pET-24a(+)-treY和pET-24a (+)-treZ为模板PCR扩增得到MTSase和MTHase基因片段,通过与表达载体pSVN连接得到重组质粒,电转化表达宿主Brevibacillus brevis,成功构建重组菌Brevibacillus brevis/pSVN-treY和Brevibacillus brevis/pSVN-treZ.重组菌在TM培养基中发酵48 h,胞内酶活力分别达到MTSase 630.0 U/g(wet cell)、MTHase 170.0 U/g(wet cell).对重组MTSase和MTHase进行酶转化实验,结果表明,当以质量浓度为100 g/L马铃薯淀粉为底物,酶转化温度为60℃,pH为5.5,加酶量为MTSase 80 U/g淀粉、MTHase 20 U/g淀粉,普鲁兰酶5 U/g淀粉和环糊精葡萄糖基转移酶(CGTase) 15 U/g淀粉,反应48 h,海藻糖转化率达到80.2％.