共表达N-乙酰转移酶和磷脂酶重组菌的构建及发酵优化

• 作者: 吉得宁 吴丹 吴敬 宿玲恰
• 来源期刊: 食品与生物技术学报
• 学科: 生物学
• 关键词: N-乙酰转移酶 毕赤酵母 尖孢镰刀菌 磷脂酶 高密度发酵
• 年，卷（期）: 2018,（8）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 853-860
• 页数: 8页
• 分类号: Q815
• 字数: 5095字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2018.08.011

摘要

为了提高磷脂酶在毕赤酵母中的表达量,构建了N-乙酰转移酶(Mpr1)和磷脂酶共表达的重组毕赤酵母.Mpr1是一类能催化乙酰基团在乙酰辅酶A和胺之间转移的胞内酶,能够降低酵母细胞内的ROS水平,具有抗活性氧(ROS)氧化胁迫生理功能.来源于尖孢镰刀菌的磷脂酶(phospholipase)是一类可以将磷脂水解为小分子脂肪酸、甘二酯和磷酸胆碱的胞外酶.研究了Mpr1对重组菌的生长和磷脂酶表达量的影响.为了获得在3.6 L发酵罐中表达磷脂酶的最佳发酵条件,分别从诱导温度、起始诱导菌体浓度和甲醇诱导浓度3个方面研究了重组菌的高密度 发酵,以恒溶氧反馈调节补加甘油和甲醇流加仪在线监测流加甲醇.结果表明:当诱导温度、起始诱导菌体质量浓度和甲醇诱导体积分数分别为28℃,40 g/L和1.0％,诱导120 h后磷脂酶活达到最高,为8 100 U/mL,总蛋白含量为8.3 mg/mL,为前期工作中磷脂酶单独表达时的1.33倍.