利用重组大肠杆菌生产α-环糊精葡萄糖基转移酶

• 作者: 刘花 吴敬 成成 李兆丰 李彬 陈坚
• 来源期刊: 生物加工过程
• 学科: 生物学
• 关键词: α-环糊精葡萄糖基转移酶 cgt基因 大肠杆菌 克隆
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 研究与开发
• 页码范围: 56-63
• 页数: 8页
• 分类号: Q555+.4
• 字数: 4819字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3678.2009.03.011

摘要

将来源于软化类芽孢杆菌(Paenibacillus macerans)的α-环糊精葡萄糖基转移酶(α-CGT)基因插入含pelB信号肽的质粒pET-20b( + )中,构建了表达载体pET20-b( + )/cgt,并将其转化表达宿主E.coli BL21(DE3).对重组菌E.coli BL21/ pET-cgt进行摇瓶发酵条件的优化,确定了其胞外表达α-CGT酶的最适条件:葡萄糖8 g/L,乳糖 0.5 g/L,蛋白胨12 g/L,酵母膏24 g/L,K2 HPO4 72 mmol/L,KH2 PO4 17 mmol/L,CaCl2 2.5 mmol/L;初始pH为7.0,诱导温度为25 ℃.在该条件下培养90 h后最终α-CGT酶的胞外比活达到22.1 U/mL,与来源菌P.macerans所产天然酶比活相比提高了42倍,实现了α-CGT酶的高效生产.将基因工程菌在上述条件下于3 L发酵罐中发酵,90 h后胞外酶比活达到22.6 U/mL,证实了工业化放大的可能性.