GST-His-Heparinase Ⅰ双标签融合蛋白的原核表达与纯化

• 作者: 丁建文 刘卫超 宋志新 程咏梅 邓超 陈敬华
• 来源期刊: 工业微生物
• 关键词: 肝素酶Ⅰ GST-His双标签 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 研究与应用
• 页码范围: 51-57
• 页数: 7页
• 字数: 3999字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6678.2014.05.010

摘要

以pET15b-Hep Ⅰ为模板,通过PCR技术扩增出上游含有6×His标签的Hep Ⅰ基因序列,克隆至表达载体pGEX-4T-1.测序鉴定后,将重组表达质粒pGEX-His-Hep Ⅰ转入E.coli BL21(DE3)感受态细菌,经IPTG诱导表达.表达产物可溶部分用GSTrap FF和HisTrap HP柱两步亲和纯化,所得产物经SDS-PAGE检测,在66 kDa和43kDa处显示特异条带,分别与GST-His-HepⅠ和His-Hep Ⅰ融合蛋白预期分子量相符;最终His-Hep Ⅰ融合蛋白的比酶活为86.45 IU/mg,纯度高达99％,与仅一步亲和纯化得到的GST-His-Hep Ⅰ融合蛋白相比,进一步提高了纯化后重组肝素酶的纯度.本研究为制备高纯度的Hep Ⅰ提供了一种方法,对制备高安全性的LMWH和解析Hep Ⅰ晶体结构具有重要意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邓超	江南大学无锡医学院	55	346	11.0	15.0
2	程咏梅	江南大学药学院	11	40	4.0	6.0
3	陈敬华	江南大学药学院	80	188	8.0	9.0
4	宋志新		6	5	1.0	2.0
5	丁建文		5	5	1.0	2.0
6	刘卫超	江南大学药学院	3	7	2.0	2.0