褐藻胶裂解酶基因在大肠杆菌中的表达及其酶学性质

• 作者: 刘玉佩 孙晓红 汪立平 赵勇
• 来源期刊: 食品与生物技术学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 褐藻胶裂解酶 蜡样芽孢杆菌 原核表达
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 189-194
• 分类号: Q78
• 字数: 4459字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2012.02.012

摘要

作者从蜡样芽孢杆菌F1-5-10中提取DNA,通过PCR克隆得到褐藻胶裂解酶基因后,将其构建到pET-30a(+)上并在大肠杆菌BL21菌株中进行高效诱导表达,继而对纯化得到的褐藻胶裂解酶蛋白进行活性检测和酶学特性研究.实验结果表明:PCR扩增出1035 bp大小的褐藻胶裂解酶基因algl(GenBank登录号:GU585575),SDS-PAGE电泳结果显示出相对分子质量约为45 000的特异性蛋白质条带.表达条件优化实验结果表明0.4 mmol/L浓度的IPTG 32℃诱导4h重组蛋白的表达量最高,约占菌体总蛋白质质量的36％.测定褐藻胶裂解酶酶活性,酶活力为11.7 U/mg.酶学性质研究表明:ALGL的酶活最适温度为35℃,热稳定性较差,最适pH值为6.6,Ca2+、Mg2对酶活有激活作用,ALGL催化褐藻胶的Km值为1.89 mg/mL,Vmax为15.01 U/mL.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵勇	上海海洋大学食品学院	111	1316	20.0	30.0
2	孙晓红	上海海洋大学食品学院	75	591	13.0	18.0
3	汪立平	上海海洋大学食品学院	35	392	12.0	18.0
4	刘玉佩	上海海洋大学食品学院	3	33	3.0	3.0