一株嗜热链球菌乳糖酶的分离纯化及酶学特性研究

• 作者: 余志坚 张健 曹永强 杨贞耐 陈超
• 来源期刊: 食品科学技术学报
• 学科: 工学
• 关键词: 嗜热链球菌 乳糖酶 优化 发酵 酶学特性
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 专题研究
• 页码范围: 42-51
• 页数: 10页
• 分类号: TS201.1|TS201.2
• 字数: 5824字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-6002.2018.02.006

摘要

微生物来源的乳糖酶应用广泛,具有酶源丰富、产量高、生产成本低、周期短等特点,备受生产企业关注.基于一株分离自传统乳制品的产乳糖酶的嗜热链球菌GST-6,采用单因素实验对影响该菌株产乳糖酶的碳源、氮源、发酵温度、发酵时间、培养基初始pH值及金属离子等进行研究,确定影响产乳糖酶的主要因素.采用响应面法对影响产酶的关键因素进行优化,确定最佳产酶的发酵条件,基于最佳发酵条件发酵,制取粗酶液.通过硫酸铵分级沉淀,DEAE-SepHarose Fast Flow离子交换柱和SepHadex G75层析柱对提取的乳糖酶粗酶液进行纯化,得到乳糖酶的纯酶.进一步对该酶的酶学特性进行研究,结果表明:影响嗜热链球菌GST-6产乳糖酶最主要的3个因素分别为培养基初始 pH 值、接种量和乳糖浓度,其存在显著影响且有交互作用.乳糖质量浓度为25.00 g/L,pH值为6.78,接种量为1%时,酶活性最大,为112.63 U/mL.酶学特性研究表明,乳糖酶的最适硫酸铵分级沉淀的饱和度为10% ~50%;乳糖酶活性与温度成正比,在30~40℃热稳定性最好;最适pH值为6,pH值在5~6时酶的稳定性最好;锰离子对酶的激活作用最强,铜离子对酶具有较强的抑制作用.抑制剂中,SDS对酶的抑制作用最强,α乳糖次之,EDTA最差.该酶的酶促反应动力学结果为Vmax=2.20 μmol/min,Km=0.27 mmol/L.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余志坚		6	17	2.0	4.0
2	陈超		6	8	2.0	2.0