重组毕氏酵母中降解hIFNβ-HSA蛋白酶的鉴定及其活性控制

• 作者: 宋一丹 窦文芳 许正宏 许泓瑜 金坚 陆茂林
• 来源期刊: 生物加工过程
• 学科: 生物学
• 关键词: 毕赤酵母 蛋白酶 SDS-PAGE 高效液相色谱 人β干扰素-血清白融合蛋白 抑制剂
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 研究与开发
• 页码范围: 50-54
• 页数: 5页
• 分类号: Q814.9
• 字数: 3054字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3678.2008.05.011

摘要

研究了重组毕赤酵母KM71/pPIC9K-IFNβ-HSA表达融合蛋白hIFNβ3-HSA过程中产物降解的问题.十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western-Blotting分析结果表明,发酵液中除了9.0×104的目的融合蛋白hIFNβ-HSA外,同时还出现了6.5×104的降解带,进一步结合HPLC分析证实该降解发生在融合蛋白hIFNβ-HSA的HSA区域.在此基础上,采用十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)活性电泳的方法,确定在融合蛋白hIFNβ-HSA表达的过程中,引起融合蛋白hIFNβ-HSA降解的蛋白酶为蛋白酶B(Proteinase B,PrB).最后.确定了可以抑制融合蛋白hIFNβ-HSA降解的最佳的蛋白酶抑制剂EDTA,通过在诱导表达阶段添加不同浓度的蛋白酶抑制剂EDTA,使融合蛋白的表达量达到22.18mg/mL,与空白对照组相比增加了61%.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	许正宏	江南大学医药学院制药工程实验室	241	1740	20.0	30.0
3	窦文芳	江南大学医药学院制药工程实验室	55	278	10.0	13.0
4	陆茂林	江南大学医药学院制药工程实验室	30	340	11.0	17.0
6	许泓瑜	江南大学医药学院制药工程实验室	77	764	14.0	23.0
9	宋一丹	江南大学医药学院制药工程实验室	1	1	1.0	1.0
10	金坚		1	1	1.0	1.0