α-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达及酶学性质研究

• 作者: 冯菲 刁文涛 向凌云 周伏忠 宁萌 王雪妍 陈国参 马焕
• 来源期刊: 中国酿造
• 学科: 生物学
• 关键词: 链球菌 大肠杆菌 异源表达 重组α-半乳糖苷酶 酶学性质
• 年，卷（期）: 2019,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 60-66
• 页数: 7页
• 分类号: Q556.2
• 字数: 5899字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11882/j.issn.0254-5071.2019.08.013

摘要

利用大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,成功异源表达了一株链球菌(Streptococcus)S1的α-半乳糖苷酶基因,重组α-半乳糖苷酶经镍柱纯化后,测定其酶学性质.重组α-半乳糖苷酶最适pH值为6.5,最适温度为50℃,在碱性环境中(pH 7.5～10.0)及在40℃以下温度条件下该酶较为稳定;酶催化动力学结果显示,该酶在最适条件下水解硝基苯-α-D-半乳糖苷(pNPG)的最大水解速率(Vmax)为508.38μmol/(min·mg),米氏常数(Km)值为1.2 mmol/L;通过薄层层析(TLC)法检测到该重组α-半乳糖苷酶可以高效地水解天然底物蜜二糖、棉籽糖和水苏糖中的α-半乳糖苷键.