重组尿酸酶发酵培养及制备的工艺条件

• 作者: 何中杰 姚明东 孟尧 师慧 王振伟 王瑞 赵明
• 来源期刊: 食品与生物技术学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 重组尿酸酶 乳糖 诱导表达 发酵 纯化
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 311-315
• 页数: 5页
• 分类号: Q55
• 字数: 2935字
• 语种: 中文

摘要

利用含PET-Urate Oxidase表达质粒的重组E.coli JM109 (DE3)菌株进行大规模发酵培养,拟建立一种高效、低成本的生产重组尿酸酶的技术工艺路线.取冻存的工程菌接种于含质量分数1％琼脂的种子培养基中进行培养,从划线平板上挑取单菌落接种于摇瓶中继续培养,最后以体积分数5％接种量接种于发酵培养基中,绘制生长曲线;以乳糖作为诱导剂与传统IPTG诱导方法进行发酵培养比较;菌体经高压均质机破碎、质量分数40％ ～60％硫酸铵分级沉淀,以及Q-Sepharose F.F.层析进行分离纯化.结果显示,乳糖作为诱导剂在300 L的发酵罐中进行培养可获得菌体湿质量2 700 g,目的蛋白质表达量占菌体可溶性蛋白质的30％左右,略高于IPTG诱导的效果;经分离纯化后该酶的纯化倍数可达原来的4.5倍,活性回收率为40％;纯化的重组尿酸酶经SDS-PAGE和HPLC分析,显示单一蛋白质色带和单一洗脱峰.成果为该酶的医学实际应用奠定了理论实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孟尧	成都医学院检验医学院	7	9	2.0	2.0
2	赵明	成都医学院检验医学院	1	2	1.0	1.0
3	何中杰	成都医学院检验医学院	1	2	1.0	1.0
4	王瑞	成都医学院检验医学院	1	2	1.0	1.0
5	姚明东	成都医学院检验医学院	1	2	1.0	1.0