两种原核表达载体对CsPPO蛋白表达活性的影响

• 作者: 堵忠颖 孙康 庞鑫 李会娟 甘玉迪 赵真 陈暄 黎星辉
• 来源期刊: 茶叶科学
• 学科: 工学
• 关键词: 茶树 多酚氧化酶 原核表达 酶活性
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 页码范围: 396-405
• 页数: 10页
• 分类号: TS272.2|Q52
• 字数: 5800字
• 语种: 中文

摘要

为了选择合适载体,获得稳定表达且具有高活性的可溶性茶树多酚氧化酶,本研究以茶树叶片为材料,克隆茶树多酚氧化酶基因(CsPPO),切除含43个氨基酸和70个氨基酸的肽段后分别与pET32a载体、pMAL-c5X载体进行重组构建原核表达载体,分别命名为pET32a-CsPPO43、pET32a-CsPPO70、pMALc5X-Cs PPO43、pMALc5X-CsPPO70,利用E.coil Transetta(DE3)菌株进行表达,经SDS-PAGE电泳检验,pMAL-c5X载体表达的目的蛋白易于提取,大量出现在上清液中;而pET32a载体表达后蛋白则基本存在于沉淀中.利用邻苯二酚、ECG、EC 3种底物在410 nm处检测CsPPO蛋白活性发现,pMALc5X-CsPPO对不同底物反应时酶活性随时间增加均呈现明显"S"型变化,表明茶树PPO氧化儿茶素类的反应并不是匀速过程.pMALc5X-CsPPO43比活力比pMALc5X-CsPPO70的高,其中pMALc5X-CsPPO43与EC反应时酶比活力最高,最大比活力为1.45×106 U·mg-1.因此,可利用pMALc5X-CsPPO43合成工业用PPO,为进一步研究其与儿茶素的反应机理,利用体外酶法高效获得茶黄素奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈暄	南京农业大学园艺学院	50	524	13.0	20.0
2	黎星辉	南京农业大学园艺学院	122	1126	18.0	25.0
3	甘玉迪	南京农业大学园艺学院	4	4	2.0	2.0
4	庞鑫	南京农业大学园艺学院	3	5	1.0	2.0
5	赵真	南京农业大学园艺学院	5	24	3.0	4.0
6	孙康	南京农业大学园艺学院	4	3	1.0	1.0
7	李会娟	南京农业大学园艺学院	2	2	1.0	1.0
8	堵忠颖	南京农业大学园艺学院	1	0	0.0	0.0