昆明假单胞菌HL22-2海藻糖合酶基因的克隆、表达及酶学性质研究

• 作者: 刘德海 安明理 权淑静 王一雯 王佰涛 王有科 解复红 陈国参 马焕
• 来源期刊: 中国酿造
• 学科: 生物学
• 关键词: 昆明假单胞菌 海藻糖合酶 克隆 表达 酶学性质
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 页码范围: 154-159
• 页数: 6页
• 分类号: Q785
• 字数: 6225字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11882/j.issn.0254-5071.2020.01.030

摘要

采用热不对称交错聚合酶链式反应(Tail-PCR)克隆云南磷矿来源昆明假单胞菌(Pseudomonas kunmingensis)HL22-2的海藻糖合酶(TreS)基因HL22-2TreS,将该基因与表达载体pETM3C连接后在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)pLysS中进行异源表达,通过Ni-NTA柱纯化重组酶HL22-2TreS,并对其酶学特性进行分析.结果表明,HL22-2TreS基因全长3336 bp,编码1111个氨基酸,氨基酸序列与Genbank数据库中相关的海藻糖合酶具有极高的相似性.重组酶HL22-2TreS的分子质量约126 kDa,该酶的最适反应温度和pH值分别为40℃和7.0,在温度20～50℃及pH值6.0～9.0条件下比较稳定,Cu2+、Hg2+、Ba2+及Al3+对海藻糖合酶的活力有强烈的抑制效果.HL22-2TreS基因对麦芽糖和海藻糖的米氏常数(Km)分别为20.6 mmol/L和87.5 mmol/L,对麦芽糖具有更高的亲和性,更容易将麦芽糖转化成海藻糖.