简并引物法克隆保加利亚乳杆菌β-N-乙酰氨基己糖苷酶基因

• 作者: 刘鹭 吕加平 崔文明 张书文 李红娟 逄晓阳
• 来源期刊: 北京工商大学学报（自然科学版）
• 学科: 工学
• 关键词: 保加利亚乳杆 N-乙酰氨基己糖苷酶 简并引物
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 专家组稿
• 页码范围: 33-37
• 页数: 5页
• 分类号: Q939.97|TS252.1
• 字数: 2962字
• 语种: 中文

摘要

β-N-乙酰氨基己糖苷酶(β-Hexcase)在细菌、植物和动物中广泛存在,具有典型的外切酶活性并可以催化切除β-N-乙酰氨基己糖的非还原性氨基己糖残基,在细菌细胞分裂中具有重要作用.选取与保加利亚乳杆菌LJJ亲缘关系近的菌种的β-N-乙酰氨基己糖苷酶蛋白序列,利用ICODEHOP和CODEHOP在线简并引物设计软件设计β-Hexcase简并引物,选取Hex1-f和Hex1-r引物对,以LJJ基因组DNA为模板经PCR扩增得到614 bp产物.PCR产物连接pGEM-T质粒载体后克隆至大肠杆菌DH5α中,筛选阳性克隆提取质粒进行测序.测序结果显示产物长度为614 bp,该DNA序列经blastx比对发现与其他已知β-Hexcase基因具有相似性,表明所克隆的序列即为LJJ β-Hexcase的基因片段.β-N-乙酰氨基己糖苷酶基因的获得为进一步研究β-N-乙酰氨基己糖苷酶与保加利亚乳杆菌自溶的关系奠定了基础.