屎肠球菌纤维素结合域谷氨酸脱羧酶构建及其酶学性质

• 作者: 杨胜远 林谦 赖丽萍 黄婷婷
• 来源期刊: 食品与发酵工业
• 关键词: 纤维素结合域 屎肠球菌 谷氨酸脱羧酶 表达 酶学性质
• 年，卷（期）: 2019,（21）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 22-30
• 页数: 9页
• 字数: 7850字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.020312

摘要

为了开发可用于高效固定化的优质谷氨酸脱羧酶(glutamate decarboxylase,GAD,EC 4.1.1.15),以Enterococcus faecium GDMCC60203为gadB基因供体,对纤维素结合域(cellulose-binding domain,CBD) GAD融合酶(CBD-GAD)的构建及其酶学性质进行了探讨.结果 显示:构建的含pRPOCB-EfagadB重组质粒的Escherichia coli GDMCC 60445可高效表达CBD-GAD,120 mL发酵液制备的纤维素固定化CBD-GAD的活力为(347.93±27.63) U/g;在无氨苄青霉素LB培养基中连续培养5批,E.coli GDMCC 60445仍可稳定表达CBD-GAD;经一步纯化,CBD-GAD在SDS-PAGE电泳上呈单一条带,分子质量约为74.02 kDa;CBD-GAD最适反应pH和温度分别为4.6和60℃,在pH 4.8 ～5.6和4～40 ℃较稳定,仅对L-谷氨酸具有催化活性,Km和Vmax分别为10.58 mmol/L和3.83μmol/(mL·min),其催化反应不受底物和产物抑制.重组菌株稳定,CBD-GAD酶学性质优良,有望应用于γ-氨基丁酸和D-谷氨酸工业化生产.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨胜远	岭南师范学院化学化工学院	10	8	2.0	2.0
2	林谦	玉林师范学院生物与制药学院	25	77	4.0	8.0
3	赖丽萍	岭南师范学院化学化工学院	1	1	1.0	1.0
4	黄婷婷	岭南师范学院化学化工学院	1	1	1.0	1.0