正交试验在优化大豆油转基因成分检测反应体系中的应用

• 作者: 姚芹 宋浩 金小花 陈枫
• 来源期刊: 食品工业
• 关键词: 大豆油转基因成分 正交试验 单管巢式PCR 温度筛选 优化
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 研究探讨
• 页码范围: 199-201
• 页数: 3页
• 语种: 中文

摘要

采用正交设计的方法对大豆油转基因成分单管巢式PCR检测反应体系的5因素(内引物浓度、外引物浓度、DNA模板用量、Taq酶用量和Mg2+浓度)在4水平上进行优化试验,优化结果采用电泳图进行直观分析,在反应体系得到优化的基础上分别对内外引物的Tm值进行梯度PCR,筛选最佳退火温度.结果表明,单管巢式PCR中内外引物的浓度差对反应结果影响最大,内引物与外引物的比例为60倍时反应条带最清晰且无非特异性条带,单管巢式PCR扩增对内外引物的Tm值有特殊要求,外引物的退火温度高于内引物.试验采用正交试验优化的单管巢式PCR反应体系特异性强,灵敏度高且快速方便.