建立了一种同时测定辣椒制品中柠檬黄、罗丹明 B 和酸性橙Ⅱ的高效液相色谱方法。样品经50%的甲醇水溶液超声处理提取,以甲醇-乙酸铵溶液为流动相进行梯度洗脱,采用紫外检测器,保留时间定性,峰面积外标法定量检测。结果表明:上述3种色素在0.006~0.128 mg/mL的浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数≥0.9997,加标回收率为98.60%~102.58%,相对标准偏差为1.6%~4.2%,检出限为0.11~0.25 mg/kg。该方法具有灵敏度高、重现性好、快速、简便的优点,适用于辣椒制品中柠檬黄、罗丹明B和酸性橙Ⅱ的同时测定。