黑曲霉β-甘露聚糖酶基因克隆及在毕赤酵母中的表达

• 作者: 吴石金 徐志伟 易蒲红 林路成 王碧娇 章亭洲 陆梦甜
• 来源期刊: 发酵科技通讯
• 学科: 工学
• 关键词: β-甘露聚糖酶 毕赤酵母 黑曲霉 基因克隆与表达
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 130-134
• 页数: 5页
• 分类号: TQ920
• 语种: 中文

摘要

采用RT-PCR方法从黑曲霉中克隆得到β-甘露聚糖酶基因(manA)cDNA,按照毕赤酵母密码子优化序列后,构建至毕赤酵母表达载体pPIC9K的EcoR I和Not I酶切位点之间,并与醇氧化酶强启动子序列和α因子分泌肽信号序列融合.构建好的载体进行大肠杆菌转化,提取大量质粒并用Sac I线性化后进行毕赤酵母转化,筛选鉴定获得酵母转化子.重组菌接种到YPD培养基中摇瓶培养24 h后,经甲醇诱导,取发酵上清液经SDS-PAGE检测到预期分子量大小的目标蛋白带,β-甘露聚糖酶最高酶活为125.78 I U/m L,酶的比活力为188.86 I U/m g.结果表明β-甘露聚糖酶基因已在毕赤酵母中成功表达并能有效分泌到细胞外.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴石金		59	478	14.0	19.0
2	徐志伟		4	13	2.0	3.0
3	章亭洲		1	0	0.0	0.0
4	王碧娇		1	0	0.0	0.0
5	林路成		1	0	0.0	0.0
6	陆梦甜		1	0	0.0	0.0
7	易蒲红		1	0	0.0	0.0