基于单核苷酸多态性位点的多重实时荧光定量聚合酶链式反应法鉴别当雄高山牦牛肉

• 作者: 刘睿茜 其美次仁 李家鹏 韦忆萱 李金春 王守伟
• 来源期刊: 肉类研究
• 学科: 工学
• 关键词: 当雄高山牦牛 品种鉴别 单核苷酸多态性位点 多重实时荧光定量聚合酶链式反应 熔解曲线
• 年，卷（期）: 2020,（10）
• 所属期刊栏目: 分析检测
• 页码范围: 47-52
• 页数: 6页
• 分类号: TS207.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/rlyj1001-8123-20200917-228

摘要

通过比对5个不同地区牦牛线粒体基因的差异,筛选出用于鉴定当雄高山牦牛的11个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)位点,将这些SNP位点作为引物3'端,同时引入引物碱基错配理念,设计出8对特异性引物,构建出2个三重和1个二重实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)体系,建立一种基于SNP位点和多重RT-PCR技术鉴别当雄高山牦牛肉的方法.结果表明:该方法特异性较好、简便快捷、结果直观可靠,能够有效鉴别当雄高山牦牛肉;方法中3个RT-PCR反应体系扩增产物对应的熔解温度(melting temperature,Tm)范围分别为反应体系A:73.1?75.2、76.0?77.3、79.0?80.0 ℃,反应体系B:69.5?72.8、75.0?77.9、78.5～80.0 ℃,反应体系C:76.1?78.1、79.5～80.7 ℃;根据3个反应体系中熔解曲线峰的有无以及Tm是否符合取值范围来判定样品是否为当雄高山牦牛肉;市售样品测定结果表明,该方法可用于实际样品中当雄高山牦牛肉的快速鉴别.