黑曲霉木聚糖酶(xynZF-2)基因克隆、表达及酶学性质分析

• 作者: 付冠华 刘振华 周晨妍 王丹丹
• 来源期刊: 中国酿造
• 学科: 生物学
• 关键词: 黑曲霉 木聚糖酶 克隆 表达 酶学性质
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 78-82
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3775字
• 语种: 中文

摘要

利用RT-PCR技术从黑曲霉(Aspergillus niger) XZ-3S中成功克隆出木聚糖酶基因(xynZF-2)的cDNA序列(Genbank登录号为:JQ700382).该基因核苷酸序列阅读框全长678bp,编码225个氨基酸,其中成熟肽为107个氨基酸.以重组质粒pUCm-T-xynZF-2为模板,扩增得到编码xynZF-2成熟肽的cDNA片段(624bp).将其与表达载体pET-28a连接,构建重组表达载体pET-28a-xynZF-2,并转化大肠杆菌(Escherichia coli) BL2 1(DE3),获得重组工程菌BL21/xynZF-2.经IPTG诱导表达,木聚糖酶的的比酶活最高可达42.33U/mg.重组表达的木聚糖酶最适反应温度为40℃,最适反应pH为5.0,在碱性条件下具有良好的稳定性.Fe3+对酶的激活作用最为明显.